Protocolo de Extração de DNA de fungo filamentoso

-



Created in BioRender.  Dallavecchia, D.L (2025) https://BioRender.com/z53a801 

De forma resumida o DNA genómico foi purificado usando o kit NZY Plant/Fungi gDNA Isolation (NZYTech, Portugal). Cerca de 100 mg de micélio foram lisados com tampão PNL1, incubados a 65 °C por 30 min, seguidos de tratamento com tampão PNL3 e clorofórmio. O sobrenadante foi clarificado numa coluna NZYSpin Homogenization, misturado com tampão PN e carregado numa coluna NZYSpin Plant. Após lavagens com tampões PNW1 e PNW2, o DNA foi eluído com tampão PNE e armazenado a -20 °C.



Este protocolo foi desenvolvido e realizado no Laboratórios de Biologia Molecular e Celular/47409 da Universidade de Aveiro
 
Para este protocolo, foi utilizado o kit comercial: NZY Plant/Fungi gDNA Isolation kit (NZYtech)






Comentários

Enviar um comentário

Mensagens populares deste blogue

Protocolo de Extração Fúngica, ITS e PCR

-
Imagem
  Created in BioRender. Dallavecchia, D. (2025)    De forma resumida, o DNA fúngico foi extraído como mostra o esquema da figura 1-1 e centrifugado (ThermoScientific Fresco 21) para separar os detritos celulares, em seguida, o sobrenadante foi reservado até a utilização. A amplificação foi realizada com kit comercial NZYTaq II 2× Green Master Mix (NZYtech-Portugal), uma solução pronta para uso, pois já contém NZYTaq II DNA polimerase, dNTPs, tampão de reação e aditivos em concentrações otimizadas, facilitando a amplificação eficiente de templates de DNA até 6 kb (concentração final de MgCl2 - 2,5 mM). Como iniciadores (primers) ITS foram utilizadas as regiões ITS1 (forward) e a região ITS4 (reverse).  As condições do PCR (Bio-Rad T100 Termal Cycler) são mostradas no esquema. A temperatura de anelamento de 52 ºC foi escolhida por orientação do fabricante dos primers. Para a técnica de PCR em tempo real (Bio-Rad C1000 Touch Termal Cycler), foram utilizadas sequências...
Leia mais »

Quantificação de DNA e RNA fúngicos

-
Imagem
Created in BioRender.  Dallavecchia, D.L (2025)  https://BioRender.com/z53a801   Antes de iniciar este protocolo, você terá de ter realizado a extração de DNA  ou RNA . Num microtubo contendo 5 μL da amostra desejada (DNA ou RNA) foram adicionados 995 μL de Tris 10 mM, pH 7,5. O conteúdo foi diluído (1:10) e transferido para uma cuvete de quartzo onde a absorvância a 280 e 260 foi medida. Este protocolo foi desenvolvido e realizado no Laboratórios de Biologia Molecular e Celular/47409 da Universidade de Aveiro Quantificação de DNA por espectrofotometria A medição da quantidade de DNA por espectrofotometria baseia-se na capacidade do DNA em solução de absorver luz a um comprimento de onda de 260 nm. Quanto maior for a luz absorvida nesse comprimento de onda, maior será a concentração de DNA na solução. Sabendo que uma absorbância (A) de 1,0 equivale a 50 µg de DNA de cadeia dupla por mililitro (mL), é possível determinar a concentração de DNA presente nas amostras ana...
Leia mais »