Quantificação de DNA e RNA fúngicos

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Antes de iniciar este protocolo, você terá de ter realizado a extração de DNA ou RNA.

Num microtubo contendo 5 μL da amostra desejada (DNA ou RNA) foram adicionados 995 μL de Tris 10 mM, pH 7,5. O conteúdo foi diluído (1:10) e transferido para uma cuvete de quartzo onde a absorvância a 280 e 260 foi medida.

Este protocolo foi desenvolvido e realizado no Laboratórios de Biologia Molecular e Celular/47409 da Universidade de Aveiro

Quantificação de DNA por espectrofotometria

A medição da quantidade de DNA por espectrofotometria baseia-se na capacidade do DNA em solução de absorver luz a um comprimento de onda de 260 nm. Quanto maior for a luz absorvida nesse comprimento de onda, maior será a concentração de DNA na solução. Sabendo que uma absorbância (A) de 1,0 equivale a 50 µg de DNA de cadeia dupla por mililitro (mL), é possível determinar a concentração de DNA presente nas amostras analisadas. Obtenha a absorvância de 260 nm e de 280 nm, depois é só fazer a divisão dos valores encontrados em cada amostra, o ratio encontrado deve estar compreendido entre 1,4 e 2. (veja mais aqui).

Importância dos Ratios 260/280 e 260/230

👉260/280 (Contaminação por Proteínas)

• < 1,8: Sugere contaminação com proteínas ou reagentes de lise celular.
• > 2,0: Pode indicar degradação do RNA ou contaminantes inesperados.

👉260/230 (Contaminação por Compostos Orgânicos)

< 2,0: Indica a presença de solventes orgânicos, fenóis, ou sais que podem inibir reações posteriores.

    2,0–2,2: Considerado ideal para RNA puro.