Eletroforese em Gel

 

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Eletroforese em Gel: Método e Princípios

A eletroforese em gel é uma técnica laboratorial utilizada para separar misturas de DNA, RNA ou proteínas com base no seu tamanho molecular. Durante o processo, as moléculas são deslocadas por um campo elétrico através de um gel que possui pequenos poros. A velocidade com que as moléculas se movem no gel está inversamente relacionada ao seu comprimento, ou seja, moléculas menores migram mais rapidamente e percorrem distâncias maiores do que moléculas maiores.

Como mencionado, a eletroforese em gel envolve um campo elétrico, onde uma extremidade do gel é carregada positivamente e a outra negativamente. Como as moléculas de DNA e RNA possuem carga negativa, são atraídas em direção à extremidade positiva do gel. No caso das proteínas, que não possuem uma carga fixa, é necessário tratá-las previamente com um detergente específico, o dodecil sulfato de sódio (SDS). Este detergente desnatura as proteínas, fazendo com que adquiram uma forma linear e fiquem carregadas negativamente, permitindo que também migrem para o lado positivo do gel e sejam separadas.

Após a separação das moléculas de DNA, RNA ou proteínas, os diferentes fragmentos aparecem sob a forma de bandas visíveis, correspondendo a moléculas com tamanhos distintos, que podem ser analisadas para diversos fins laboratoriais.

Fonte: Eletroforese em Gel    

1. Gel de Eletroforese (de forma geral)

É o conceito mais amplo. Refere-se a qualquer método que usa um gel (feito de materiais como agarose ou poliacrilamida) e uma corrente elétrica para separar moléculas.

Aplicação: Pode ser usado para separar diferentes tipos de biomoléculas, como DNA, RNA ou proteínas.

2. PAGE (Polyacrylamide Gel Electrophoresis)

É um tipo específico de gel de eletroforese que usa poliacrilamida como matriz.

Uso principal: Separar proteínas com base na sua carga, tamanho e forma.

Como funciona: Sem modificações, o PAGE separa proteínas com base em três fatores:

Forma: Proteínas mais compactas movem-se mais rápido do que as alongadas.

Tamanho: Moléculas menores passam mais facilmente pela rede do gel.

Carga elétrica: Proteínas com maior carga movem-se mais rápido.

3. SDS–PAGE

É uma variação do PAGE, onde as proteínas são tratadas com o detergente SDS (Sodium Dodecyl Sulfate) antes da separação.

O que o SDS faz:

Uniformização da carga: O SDS cobre as proteínas com cargas negativas, eliminando as diferenças de carga entre elas.

Desnaturação: Faz as proteínas perderem sua forma natural (ficam "esticadas").

Resultado: As proteínas são separadas apenas pelo tamanho molecular, já que a carga e a forma são neutralizadas pelo SDS.

Uso comum: SDS–PAGE é amplamente utilizado em laboratórios para analisar proteínas em misturas complexas e determinar o seu tamanho molecular.

Resumo das diferenças:

Técnica	Material do Gel	Separa por	Tratamento com SDS	Usos
Gel de Eletroforese	Agarose ou poliacrilamida	Varia (DNA, RNA, proteínas)	Não necessário	Separação geral de biomoléculas.
PAGE	Poliacrilamida	Tamanho, carga, forma	Não	Separar proteínas considerando múltiplos fatores.
SDS–PAGE	Poliacrilamida	Apenas tamanho	Sim	Separar proteínas por tamanho molecular.